作者：王東紅 韓素麗 郭銳芳

審校：劉廣明

單位：長治醫學院附屬和平醫院

醫學實驗室在不停的發展，變化之快超出我們的想象，實驗室将面臨種種的挑戰，高質量、高效率、高自動化将是實驗室未來的發展方向，不同的自動化儀器将進入實驗室。

因此我們就來解剖一款血細胞分析儀，型号為貝克曼DXH800。血細胞分析包括計數和分類，我們主要分享的是白細胞五分類的液路系統。

血細胞五分類的液路系統

白細胞五分類的液路包含三個核心的部件：混勻池（mixing chamber）、鞘液罐（Sheath Tank）、流動池（Flowcell）。

混勻池的主要作用是制備樣本，樣本經過特殊的溶血素處理後，進入流動池進行分類，在分析之前要形成鞘流，所以要有一個鞘液的儲存場所——鞘液罐，有了它的存在，就能保障大批量樣本連續測定；分類的核心是流動池，它的主要作用是樣本在鞘液的包裹下，以層流形式通過光檢測區，在激光光源的照射下，對電阻抗、電導及散射光（VCS）的分析，從而對白細胞進行分類。

談到液路無非是試劑和樣本，而試劑包含了2種溶血素，酸性和堿性溶血劑。

酸性溶血劑（E-Lyse）：它的滲透壓較小，主要使細胞膨脹，因為紅細胞膜上膽固醇成分比白細胞多，所以紅細胞先膨脹破裂，白細胞隻是膨脹但未破裂。

堿性溶血劑（S-Lyse）：它的滲透壓比較大，補償了樣本中未破裂細胞的滲透壓，使膨脹的白細胞又恢複到了原态。

注意：區分CBC溶血劑：CBC Lyse滲透壓大，使細胞皺縮；CBC Lyse還要與RBC中的HGB反應，生成血紅蛋白複合物，進行血紅蛋白測定。

硬件介紹

01、混勻池

通過混勻池制備的樣本，我們要對它有2個要求：一隻能是WBC，二要接近于人體自然狀态的WBC。

混勻池有7個小孔，上面的塑料端口是酸性溶血劑與樣本的進入端，側面端口是堿性溶血劑的進入端，上面鐵制孔是用于接通空氣并加正壓，是動力小孔，為樣本進入流動池提供壓力，下面端口是樣本進入流動池的通道；上面中央最大的鐵制孔是鞘液進入端，用于測試完一個樣本後對混勻池的清洗，再通過下端口排出；上面最後一個塑料口是乳膠顆粒的進入端，乳膠顆粒是人工制備的細胞顆粒，它主要是對儀器的光路和整個流體壓力進行校準，在标本檢測中不使用。混勻池是固定在一個輪子上的，輪子是帶着混勻池進行往返搖動，使得樣本與試劑充分混勻。

02、鞘液罐

混勻池樣本制備完成進入流動池進行測試前，要與鞘液結合。而鞘液儲存在鞘液罐中，鞘液罐最核心部件就是液面探測的浮子，浮子會随着液面的高低，上下浮動，如果鞘液液面過低，上面浮子開關就會打開，從上面端口的加壓系統，加入負壓，罐子裡的負壓會使鞘液進入，鞘液的液面開始上升，等上升到一定高度後，浮子開關關閉，罐内負壓消失，液面停止；如果有樣本測試時，上端口加入正壓使鞘液進入到流動池，包裹着細胞形成單細胞束。

03、流動池

外觀上有6個孔，上下為樣本進入端和排廢端，側面自下而上1、2、3、4為上下鞘液進、出口，一般情況下2、4鞘液出口為關閉，隻有儀器在執行開機、關機、清洗流動池的時候才打開。

分類計數小孔位于流動池的中央。兩個圓錐形的電極位于小孔的上下兩端，流動池的上下兩個腔體内注滿了稀釋液為上下兩個電極之間提供導電介質。

由于樣本流和鞘液流的壓力及粘質性的不同 ，使得它們不會被混合，從而保證樣本束中的細胞一個一個的通過分類小孔。

自動化智能分析

01、計數與時間的概念

實際工作中樣本是成批量進行分析的，那如何保障自動化分析流程不中斷呢？比如遇到樣本有凝塊，樣本量過少時，儀器又該如何停止對樣本檢測，去進行下一個樣本的測試呢？那就要弄清幾個概念：

DC Count (total count) = 經過流動池的白細胞數量要達到8192（=213 ）個，才能保障分類結果的準确性。

Displayed Count (顯示到散點圖上的細胞數) = 比較理想的數字≥7500，也就是計數總時間90%時的細胞數。

DC Count Time (in seconds) = 計數達到8192個時需要的總時間。

當遇到樣本中細胞數量達不到時，就要引入一個另一個概念：最優化時間T（秒）=63/WBC±1秒。

如果優化時間超過優化時間的50%，計數仍未達到 8192個顆粒，就會提示報警：Low Event D，而進入下一個樣本的測試。

如果優化時間低于優化時間的50%以下，也會報警：High Event D。

02、DIFF常見報警分析

• Low Event D ：Flowcell部分堵住，計數時間太長。

主要原因：

1、樣本流路堵塞：流動池部分堵、進樣管堵或者折住或者破。

2、分類壓差降低：混勻池上有管子破裂、混勻池破、調節閥問題等。

3、鞘液壓力過高。

4、樣本沒有進入Flowcell。

5、到達mixing chamber的樣本濃度偏低：分類用的的管子中樣本不足、分類用樣本沒有完全到達mix chamber、mixing chamber頂部是否髒、mixing chamber是否完全排空等。

6、WBC計數偏高，造成規定時間偏短。

• High Event D：Flowcell部分堵住，計數時間太短。

High Event D的定義：優化時間低于優化時間的50%以下。

主要原因：

1、化學平衡問題：mix chamber動作異常、樣本進入混勻池的速度慢、E-LYSE或S-LYSE的量不正确或不匹配、Heater管子折住、試劑異常、環境溫度偏低等。

2、樣本的問題：其具體原因是一些特殊的樣本如肝炎病人，新生兒，孕婦等，這些病人的RBC表面的負電荷較多，E-Lyse不足以将其溶解；或者是這些病人血樣中膽汁酸的含量偏高，膽汁酸會與E-Lyse反應，從而大量的消耗了E-Lyse。這些病人需要稀釋做。

3、Flowcell中有氣泡：鞘液罐空。

4、分類第一秒鐘沒有樣本經過Flowcell：進樣管破、與鞘液有關的閥的問題等。

• Flow Cell Clog D：Flowcell完全堵住，儀器停機，這種情況不多見。

做為新時代的檢驗人，不止要知其然更要知其所以然，我們不能隻做機器似的檢驗人，每天循環似的上機審核，儀器故障停機等候工程師維修，我們要自己了解标本上機後結果如何而來，儀器故障時知道問題所在。

來源：檢驗醫學網