組織分離是一種用子實體的某一部分來分離菌種的方法。

因為組織分離法操作簡便，不易帶入雜菌，容易獲得純菌種。後代不易發生遺傳重組等變異，能保持原菌株的優良特性。因此組織分離是目前應用最廣泛的分離手段。

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組織分離注意事項

種菇的選擇:最好采用正處于旺盛生長中的幼嫩子實體或菇蕾作為分離材料，選擇菇形正常，菌蓋圓整，頂端較尖，尖頂凸起完整，菌柄圓正，菌柄短而結實，大小适中，無蟲害、黴變或雜菌感染的子實體，鮮品或幹品均可。不要選擇很老的子實體做組織分離，由于子實層已經發育成熟，很容易在取組織的同時取到孢子，成為混合菌種。而幼嫩的子實體不容易污染，組織分離容易成功。

一般用野生或栽培的新鮮子囊果(子實體)，也可用幹子實體來進行分離，幹子實體作菌種分離材料的成活率及子實體産量均比新鮮子實體作分離菌種的材料成功率更高。

種菇的采集:菌柄基部最好帶少量土壤一起采集，用吸水紙包裹2~3層，再用報紙包裹，低溫下帶回實驗室。不要把菌柄基部剪掉，留下空心的子實體進行分離。

注意一般不要把标本放入塑料袋内運送，也絕對不能用烘幹的辦法處理需要分離的标本。

分離菌種盡量不要用酒精、升汞、來蘇爾、煤酚皂、甲醛、二氯異氰尿酸鈉等消毒劑對子實體表面進行消毒，因為這些消毒劑容易浸入子實體内部，殺死菌絲，導緻所有分離物都不成活;也不需要用無菌水多次清洗，水容易滲透入菌肉組織，把表面的雜菌帶入接種塊導緻污染。

組織分離時可以把子實體表面快速在酒精燈火焰上通過2一3次，适當灼燒一下表面。

切取組織塊時，盡量不要穿過菌肉，因為沒有表面消毒，容易導緻全部污染。

組織分離的方法

1. 選擇無污染并菇形健壯的蘑菇幼菇(6分成熟)，采摘後及時放入滅過菌的紙袋中帶回接種室，連同母種用試管培養基等用品一起放入接種箱或超淨工作台内消毒。

2.先用75%的酒精消毒雙手，将鑷子、接種鏟、小刀等接種用用具用酒精消毒，用酒精棉擦一下，拿到酒精燈上燒一下。

3.用略幹的酒精棉球将子囊果菌柄特别是基部與土壤交界處的灰塵或泥土擦拭幹淨，擦拭過程中及時更換酒精棉球。

4.切開羊肚菌，切取菌柄與菌蓋交接處組織較厚的部位，什麼地方肉厚用什麼地方，切取菌柄2~5mm組織塊2~3塊，用鑷子夾住，将組織塊在無菌水中涮一下，将組織塊在酒精燈上快速的過幾下。（在這個過程中少用升汞或酒精消毒，避免将羊肚菌菌絲全部殺死。）

5.将組織塊放入培養皿培養，在22~25℃避光培養，2~3d萌發出新菌絲，新菌絲長到培養基上，48小時後，此時菌絲長約0.2~ 0.4 cm，菌絲粗壯；56 ~ 72 h後，成功萌發的菌絲将長至0.5 ~ 1.5 cm長，菌絲纖細，無色，不濃密，前端近似整體，根根分明，此時可挑取菌落尖端進行挑出純化。

6.純化後的試管要貼上标簽，注明接種日期和品種的名稱。

7.純化的羊肚菌12 h左右，可見到從接種塊萌發到培養基上的新生菌絲，7天左右長滿試管，并出現白色菌核，10天左右，菌核有初始的白色、小，逐漸變淺黃變大；培養15天左右可以放後4度冰箱保存。

得到純菌種後進行轉管操作，15～18天菌絲即可長滿試管，挑選菌絲健旺無污染的菌管再進行轉接擴繁，須經出菇試驗合格後用于生産。

羊肚菌皮薄，遇水，酒精不會萌發，根據以上方法，可進行多次試驗，根據實驗操作來調整相關細節，以上操作僅供參考。如您有更好的技術，請與我們聯系，更好溝通交流。

其次，羊肚菌作為一種子囊菌，與其他食用菌不同的是，最大缺點是容易退化，變異和生黴，因此，分離菌種要進行出菇和比較試驗。

本文綜合自我們自己的實驗室試驗，百度百科，《羊肚菌生物學基礎、菌種分離制作與高産栽培術》賀新生著；如有侵權，請聯系作者删除。如有不實和錯誤，歡迎批評指正。