檢測蛋白質的方法有哪些-tft每日頭條

　　1、凱氏定氮法

　　凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品将有機氮都轉變成無機铵鹽，然後在堿性條件下将铵鹽轉化為氨，随水蒸氣蒸餾出來并為過量的硼酸液吸收，再以标準鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量。

　　由于蛋白質含氮量比較恒定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。

　　2、雙縮脲法

　　雙縮脲法是一個用于鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個堿性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制。

　　當底物中含有肽鍵時（多肽），試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。

　　3、酚試劑法

　　取6支試管分别标号，前5支試管分别加入不同濃度的标準蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，不加标準蛋白溶液，在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，于650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。

　　4、紫外吸收法

　　大多數蛋白質在280nm波長處有特征的最大吸收，這是由于蛋白質中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用于測定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。

　　取9支試管分别标号，前8支試管分别加入不同濃度的标準蛋白溶液，1号試管不加标準蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，而不加标準蛋白溶液，每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一緻，将液體混合均勻，在280nm波長處進行比色，記錄吸光度值。

　　5、考馬斯亮藍法

　　考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後，其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。

　　在考馬斯亮藍 G-250 過量且濃度恒定的情況下，當溶液中的蛋白質濃度不同時，就會有不同量的考馬斯亮藍 G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式，而且這種轉變有一定的數量關系。

　　一般情況，當溶液中的蛋白質濃度增加時，顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加，因此可以用考馬斯亮藍 G-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。