紫杉醇是紅豆杉中主要活性成分,是萜類環狀結構的天然次生代謝衍生物。因其含量低、結構類似物較多、純度要求高、分離過程中易轉化等因素,給提取、分離和測定帶來了較大的困難。如何以低成本和簡單的工藝提取紫杉醇,将紫杉醇與其類似物分離,獲得純度較高的紫杉醇産品,并對其進行精确的測定就成為研究的重點。
常用的提取方法有:甲醇有機溶劑萃取法、乙醇有機溶劑萃取法等。萃取又可分為初級萃取和次級萃取,在這兩級萃取過程中,溶劑的選擇具有重要影響。
常用的純化方法有:正相柱色譜法和反相色譜法主要包括常壓和低壓柱層析、幹柱層析等法,以及一些較先進的分離手段如高速逆流色譜等。
目前有關紫杉醇類物質的提取方法,大多采用有機溶劑對紅豆杉原料多次浸提,浸提液回收後再用有機溶劑萃取,再經層析分離後結晶得到紫杉醇。這些方法存在最大問題是提取收率低且設備昂貴,并且造成了巨大的資源浪費,提高了生産成本,存在較大環保問題。
具體提取步驟為:
取紅豆杉原料研磨過100至200目篩,向其中加入5至10倍量的水及百分之零點一的冰醋酸,加纖維素酶于超聲下酶解2至5小時;加入等體積的有機溶劑,超聲萃取0.5至2小時;靜置過濾分液,水相用有機溶劑萃取2到3次,合并有機相;減壓除去有機溶劑,所得浸膏與等質量中性氧化鋁拌樣,過200至300目矽膠或氧化鋁層析柱,石油醚和乙酸乙酯洗脫除去脂溶性雜質,再以醇與乙酸乙酯混合液洗脫,監測,收集醇與乙酸乙酯流份;減壓除去醇與乙酸乙酯,所得粗品依次經弱堿性樹脂柱和強堿性樹脂柱,二氯甲烷與丙酮混合液洗脫,得到純品;純品再經重結晶精制。